カンザス州に住む若夫婦ジョンとメアリーは、長男ディーンと次男サムをもうけて幸せに暮らしていた。しかしある晩、彼らウィンチェスター一家に恐ろしい出来事が起きる。生まれたばかりのサムの部屋でメアリーの悲鳴を聞きつけたジョンは信じられない光景を目の当たりにした。なんとメアリーが天井に張りつけになり、その身体から火が噴き出したのだ。子供部屋はあっという間に火の海になり、ジョンは辛うじてディーンとサムを連れ逃げ出した。

それから20年以上が過ぎ、サム・ウィンチェスターはスタンフォードに通う大学生に成長。恋人のジェシカに励まされながら弁護士という夢に向かうサム。ロースクールの面接を数日後に控えた晩、兄ディーンが突然現れる。ディーンは、行方不明になった父親を一緒に捜してほしい、と言う。母メアリーが死んでから父ジョンは人が変わったように悪霊退治を始め、メアリーを殺した悪魔の正体を突き止めようとしていた。息子たちも幼いころからジョンの狩りに付き合わされ、長男ディーンは悪霊ハンターとして父親と同じ道を歩んでいる。サムはそんな父親の生き方について行けけずにいたのだ。しかし、父ジョンの身に危険が迫っている、というディーンの言葉に、面接までに戻って来るという約束で、サムは兄と共に父親捜しに出かける。

ジョンが最後に残した留守電メッセージを手がかりに、ディーンとサムは失踪事件の多発するある田舎町に向かう。どうやらその事件には幽霊が関わっているらしく、ジョンもその事件を追っていたようだ。そこでは、父ジョンは見つからなかったものの彼の手帳を見つけたディーンとサムは、そこから父親の行き先を判読。そしてウィンチェスター兄弟は失踪事件を引き起こしていた幽霊を見事退治する。

しばらく離れていたとはいえ兄弟の絆か、昔のコンビネーションがすぐさま戻ったことで、やはり最強のパートナーは弟であることを再確認し別れを惜しむディーン。だがサムは、父の行方を追うディーンを見送り、約束どおり自分のアパートへと帰っていく…。しかし帰宅した彼がそこで見たものは、天井に張りつけになった恋人ジェシカの姿だった！メアリーの時と同様、ジェシカの身体から火が噴き出しアパートは炎に包まれる。母と同じ超常現象で恋人を失い、ようやく父親の気持ちが理解できるようになったサムは、真実を求め復讐のために立ち上がることを決意。こうしてウィンチェスター兄弟の悪霊狩りの旅が始まった。

長い旅の末、ようやく父ジョンと合流したウィンチェスター兄弟。彼らは「どんなものでも殺せる銃」コルトを手に入れ、悪魔退治のため結束を固める。が、悪魔の罠にジョンが捕まってしまい、コルトの弾丸も残り1発となってしまう！ そしてシーズン1のラスト、ジョン、ディーン、サムの乗る車に悪魔の運転する巨大なトレーラーが激突！果たしてウィンチェスター家の3人の運命は？！

＜シーズン２＞
何とか一命を取り留めたジョンとサムだったが、ディーンは重傷で意識を回復しない…。息子の命を救うため、ジョンがとった行動とは・・・？

そしてシーズン２からの新キャラクターとして、かつてジョンとコンビを組んでいた悪霊ハンターの妻で、現在はハンターたちが集う酒場を営むエレンと、その娘で父と同じ悪霊ハンターを目指すジョーが登場。さらなるパワーアップを図るシーズン２、ついに日本初放送！！